支原体是一类常见的原核生物,常常在实验室内污染细胞。其主要污染来源包括细胞和毒种,血清、鸡胚、原代细胞等动物性材料,以及操作者自身的影响。据数据显示,约有15%-35%的细胞存在支原体污染。支原体不仅会改变宿主细胞的结构和功能,还会影响实验结果的准确性;其还可能干扰细胞的代谢和生长,改变核酸合成,影响细胞抗原性,导致染色体的改变,干扰病毒的复制和模仿病毒效应。因此,检测和去除支原体对于细胞培养至关重要。可以说,要想让细胞健康生长,去除支原体污染是不可或缺的。
在去除支原体污染的过程中,面临的首要挑战是如何检测细胞中的支原体。支原体是一类无细胞壁、直径约0.1-0.3μm的原核微生物,常规的革兰氏染色对其无效,且在光学显微镜下难以观察。此外,某些支原体(如口腔支原体)可能与宿主细胞建立潜伏感染,不会引起明显的细胞病变,难以察觉。
经典的支原体检测方法包括培养法和指示细胞法,但这两种方法耗时较长,培养条件较为苛刻,在过程中易受到污染,导致检测结果的不准确。随着生命科学的发展,目前已经有一些更高效、准确的方法可以替代传统方法。根据《欧洲药典》第267条的规定,在适当的验证之后,核酸扩增技术(NAT)可以替代传统的培养法和指示细胞法。NAT法高灵敏度,耗时相对较短。另一种基于支原体特异性激酶表达的生化检测法,在20-30分钟内即可完成对支原体的检测,其灵敏度接近NAT法,更适合进行快速检测。
在支原体检测方法的比较中,我们可以明确各方法的时间和灵敏度:培养法需要28天,指示细胞法4-5天,NAT仅需2-5小时,而生化法则更快,在20分钟内可完成检测。各方法的灵敏度分别为:培养法为10 cfu/mL,指示细胞法为100 cfu/mL,NAT法为10 cfu/mL,生化法为50 cfu/mL。不过,单一的检测方法通常无法达到100%的特异性,通常需要结合多种方法以提高特异性。
在支原体检测方面,尊龙凯时推出了两款快速检测产品,分别基于NAT和激酶生化检测技术,能够在半小时内完成检测,灵敏度高达10 cfu/mL,助力快速识别支原体污染。具体产品配置包括:
- ABS90062一步法快速支原体检测试剂盒(等温扩增法):利用等温扩增和可视化颜色变化,可快速检测细胞培养液中的8种常见支原体,30分钟内完成,无需仪器。
- ABS90283 MYCO-LTM荧光素酶支原体检测试剂盒:特异性检测活体支原体,30分钟内完成分析,灵敏度高。
除了检测试剂外,尊龙凯时还提供了全面的支原体预防与清除试剂,帮助用户有效应对支原体污染问题。定期检测、应急处理和环境管控是防控支原体污染的重要步骤,建议对珍贵细胞株每传代一次使用NAT或生化法检测;一旦发现污染,应立即使用专门的清除试剂结合传代离心法降低支原体载量;同时,定期对实验环境进行消毒处理。
通过专业化的检测产品和标准化的操作流程,尊龙凯时能够有效构建防护屏障,保障细胞培养的稳定性和可靠性。